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谷類(lèi)及中藥材中多真菌毒素檢測(cè)液質(zhì)質(zhì)法的快速前處理方法

更新時(shí)間:2024-08-21點(diǎn)擊次數(shù):1393

真菌毒素為真菌增殖時(shí)產(chǎn)生的次生有毒代謝產(chǎn)物。真菌的孢子能透過(guò)空氣、風(fēng)力、水流和動(dòng)物等方式來(lái)傳播。只要有少量蛋白質(zhì)、淀粉、脂質(zhì)及水分,真菌就能生長(zhǎng),因此谷物、果實(shí)類(lèi)、玉米、花生、飼料及中藥材等都可能檢出真菌毒素。黃曲霉毒素具有潛在的肝毒害及致病性,其性質(zhì)穩(wěn)定,因此易出現(xiàn)在食物鏈中。

 

應(yīng)用方案概述:

 

本篇以FaTEx-gen快速萃取凈化柱進(jìn)行前處理除雜,使用LC-MS/MS儀器分析谷類(lèi)、花生、花生醬、豆類(lèi)、飼料、中藥材等基質(zhì)中的11種真菌毒素,包含黃曲du素類(lèi)、赭曲du素A及鐮孢菌毒素類(lèi)(伏馬毒素、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(嘔吐毒素)、玉米赤霉毒素等),外標(biāo)法定量分析。

 

樣品制備流程如下:

 

秤樣2g左右,加入一定體積的樣品萃取溶液,高速震蕩機(jī)震蕩30分鐘,于3500rpm離心5分鐘,得到上清液。取一定體積的上清液加入FaTEx-gen 快速萃取凈化柱,收集全部濾液混勻。取一定體積的濾液,氮吹回溶后上機(jī)到LC-MS/MS分析。

 

Agilent 6470液相層析串聯(lián)式質(zhì)譜儀搭配ZORBAX Eclipse Plus C18色譜柱,關(guān)于前處理詳細(xì)步驟和儀器分析條件,歡迎索?。?/span>

 

分析結(jié)果如表所示,回收率落在81.9~112.7%范圍內(nèi),CV%皆小于20,顯示此為一快速穩(wěn)定的檢驗(yàn)方法。

 

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:

 

1、真菌毒素11項(xiàng)藥劑之添加濃度

分析物

中文名稱(chēng) 

添加濃度(ng/g)

Aflatoxin B1

黃曲mei素 B1

2.5

Aflatoxin B2

黃曲mei素 B2

2.5

Aflatoxin G1

黃曲mei素 G1

2.5

Aflatoxin G2

黃曲mei素 G2

2.5

Ochratoxin A

赭曲霉毒素 A

2.5

T-2 toxin

T-2毒素

5

HT-2 toxin

HT-2毒素

5

Deoxynivalenol

嘔吐毒素

25

Zearalenone

玉米赤霉烯酮

25

Fumonisin B1

伏馬毒素 B1

100

Fumonisin B2

伏馬毒素 B2

100

 

2、谷類(lèi)樣品中11項(xiàng)霉菌毒素之回收率和變異系數(shù)

中文名稱(chēng)

英文名稱(chēng)

黃豆

花生

CV%

R%

CV%

R%

黃曲mei素 B1

Aflatoxin B1

2.3

108.5

9.0

97.5

黃曲mei素 B2

Aflatoxin B2

3.7

105.0

2.4

98.2

黃曲mei素 G1

Aflatoxin G1

2.6

105.4

2.0

102.9

黃曲mei素 G2

Aflatoxin G2

3.4

107.4

4.0

103.0

赭曲霉毒素 A

Deoxynivalenol

4.8

100.3

1.6

103.9

T-2毒素

Fumonisin B1

8.1

90.3

6.1

89.0

HT-2毒素

Fumonisin B2

13.5

81.9

5.3

96.7

嘔吐毒素

HT-2 toxin

9.1

109.7

13.4

100.4

玉米赤霉烯酮

Ochratoxin A

2.8

101.9

3.8

106.0

伏馬毒素 B1

T-2 toxin

5.9

110.1

5.6

112.7

伏馬毒素 B2

Zearalenone

8.1

108.6

5.0

94.4

*重復(fù)性,n=3

 

結(jié)論:

1、本篇以FaTEx-gen  SPE柱凈化樣品,采用液質(zhì)質(zhì)(LC-MSMS)的儀器分析方法,檢測(cè)谷類(lèi)樣品(黃豆及花生)之多重霉菌毒素(黃曲mei素類(lèi)、赭曲du素A及鐮孢菌毒素類(lèi))共11項(xiàng),每次分析時(shí)間13分鐘,為快速準(zhǔn)確的檢驗(yàn)方法。

2、 FaTEx-gen萃取凈化柱可針對(duì)復(fù)雜檢體基質(zhì)加強(qiáng)凈化,降低基質(zhì)干擾。

3、 FaTEx-gen柱檢測(cè)添加多重毒素標(biāo)準(zhǔn)品之谷類(lèi)樣品(添加濃度:黃曲mei素B1 Aflatoxin B1,黃曲mei素B2  Aflatoxin B2,  黃曲mei素G1  Aflatoxin G1,  黃曲mei素G2 Aflatoxin G2,赭曲霉毒素 A  Ochratoxin A2.5 ng/gT-2 toxin, HT-2 toxin5 ng/g;嘔吐毒素Deoxynivalenol, 玉米赤霉烯酮 Zearalenone25 ng/g;伏馬毒素 B1  Fumonisin B1,伏馬毒素 B2  Fumonisin B2100 ng/g)回收率落在81.9~112.7%范圍內(nèi),變異系數(shù)皆小于20,為穩(wěn)定之檢驗(yàn)方法。

4、 2015年藥典中的中藥材:根及根莖類(lèi):遠(yuǎn)志;果實(shí)種子類(lèi):大棗、肉豆蔻、決明子、麥芽、陳皮、使君子、柏子仁、胖大海、蓮子、桃仁、檳榔、酸棗仁、薏苡仁;動(dòng)物類(lèi):水蛭、地龍、全蝎、僵蠶。


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